Published October 1965
| Version v1
Book
Autoradiography of 3H- and 14C-Thymidine in Bone Marrow by a Double-Emulsion Technique
Creators
- 1. Department of Clinical Therapeutics, University of Athens, Alexandra Hospital, Athens (Greece)
Description
In the present work a new method has been developed to study the generation time of bone- marrow cells in cultures, after double labelling with 3H- and 14C-thymidine, by means of a double-emulsion autoradiographic technique. In such an investigation it is not practicable to use a single thick layer of emulsion since this prevents satisfactory staining of the bone marrow cells with Giemsa stain. If the specimen is stained before making the autoradiograph it must be covered with a protective layer to retain the stain and this absorbs a large proportion of the 3H-electrons. The technique adopted is a modification of the method described by Baserga and Nemeroff. The bone-marrow smear is covered with a very thin layer of the fine-grain Gevaert emulsion NUC 715. After an exposure suitable for the 3H-thymidine (1-5 d)the emulsion is processed and the bone marrow can be stained adequately through the thin emulsion. It is then dipped in a 7% solution of celloidin in amyl acetate to protect the stain during subsequent procedures (celloidin in ether-alcohol mixture removes the stain). The specimen is then dipped in Kodak NTB-2 emulsion having a larger grain size than the first emulsion, and exposed to 14C-electrons (2-6 weeks). The second emulsion can then be processed without affecting the staining of the bone-marrow smear. The celloidin layer is sufficiently thick to absorb all 3H-electrons so that an increase in grain density in the second emulsion is due to 14C electrons only. Moreover the celloidin layer still permits good autoradiographic resolution in the second emulsion. Autoradiographs in the first and second emulsion are easily recognised by the difference in grain size. It is thus possible to distinguish between cells containing only 3H-thymidine and only 14C-thymidine or both 3H- and 14C-thymidine. The interpretation of the results will be discussed. (author)
Abstract (French)
Les auteurs ont mis au point une nouvelle méthode pour étudier, par un procédé autoradiographique à deux émulsions, le temps de formation des cellules de moelle osseuse dans les cultures après double marquage de la thymidine par 3H et 14C. Pour ces travaux, il n'est guère pratique de n'utiliser qu'une seule couche épaisse d'émulsion, ce qui empêcherait d'obtenir une coloration satisfaisante des cellules de moelle osseuse avec le colorant Giemsa. Si l'on colore le spécimen avant de procéder à l'autoradiographie, il faut le recouvrir d'une couche protectrice pour qu'il retienne le colorant; or, cette couche absorbe une fraction importante des électrons émis par 3H. La méthode adoptée est une variante de celle qu'ont décrite Baserga et Nemeroff. Le frottis de moelle osseuse est recouvert d'une couche très mince d'émulsion Gevaert NUC 715 à grain fin. Après une exposition appropriée à la thymidine- 3H (1 à 5 j), l'émulsion est développée et la moelle osseuse peut être colorée comme il convient à travers la mince couche d'émulsion. On plonge ensuite l'échantillon dans une solution à 7°7o de celloïdine dans de l'acétate d'amyle pour protéger le colorant durant les opérations ultérieures (la celloïdine doit être dissoute dans un éther car une solution alcoolique détruirait le colorant). Puis le spécimen est placé dans une émulsion Kodak NTB-2 à grain plus gros et exposée aux électrons émis par 14C (2 à 6 semaines). On peut alors traiter la deuxième émulsion sans altérer la coloration du frottis. La couche de cello'idine est suffisamment forte pour absorber tous les électrons de 3H de sorte que le noircissement de la deuxième émulsion provient des seuls électrons de 14C. En outre, la couche de celioïdme permet d'obtenir une bonne résolution autoradiographique dans la deuxième émulsion. Les autoradiogrammes obtenus sur la première et la deuxième émulsion respectivement sont faciles à reconnaître par la différence de grosseur du grain. Il devient ainsi possible de distinguer les cellules qui ne contiennent que de la thymidine-3H de celles qui ne contiennent que de la thymidine-14C ou de la thymidine- 3H/-14C. Les résultats seront discutés. (author)Abstract (Spanish)
Los autores han ideado un nuevo método para estudiar, con ayuda de una técnica autorradiográfica de doble emulsión, el tiempo de generación de células de médula ósea en cultivos, después de su marcación doble con timidina- 3H y timidina- 14C. En esta investigación no es posible emplear una capa única y gruesa de emulsión, ya que con ello resulta imposible teñir satisfactoriamente las células de médula ósea con colorante de Giemsa. Si el espécimen se colorea antes de la autorradiograffa, es preciso cubrirlo con una capa protectora para retener el colorante y esa capa absorbe gran parte de los electrones del 3H. La técnica empleada constituye una modificación del método descrito por Barserga y Nemeroff. Se cubre el extendido de médula ósea con una capa muy delgada de emulsión Gevaert de grano fino NUC 715. Después de una exposición adecuada para la timidina- 3H (1-5 dfas), se trata la emulsión y la médula ósea puede ya teñirse satisfactoriamente a través de la capa fina de emulsión. A continuación se sumerge el espécimen en una solución de celoidina en acetato de amilo al 7% para proteger el colorante durante las operaciones subsiguientes (la celoidina en una mezcla de éter y alcohol elimina el colorante). Elespécimen se sumerge luego en emulsión Kodak NTB-2, cuyo grano es mayor que el de la primera emulsión, y se expone a los electrones del 14C (2-6 semanas). La segunda emulsión puede entonces tratarse sin que la operación afecte a la coloración del extendido de médula ósea. La capa de celoidina es lo suficientemente gruesa para absorber todos los electrones del 3H, de forma que todo aumento de la densidad de los granos en la segunda emulsión es debida a los electrones del 14C exclusivamente. Es más, la capa de celoidina no impide una buena resolución autorradiográfica en la segunda emulsión. Las autorradiograffas de la primera y de la segunda emulsión se reconocen fácilmente por la diferencia de tamaño del grano. De esta forma es posible distinguir entre las células que sólo contienen timidina- 3H y las que contienen o bien exclusivamente timidina- 14C o bien timidina - 3H y timidina-14C. Los autores presentan una interpretación de los resultados obtenidos. (author)Abstract (Russian)
Opisyvaetsja novyj metod opredelenija vremeni zhizii pokolenija kletok kostnogo mozga v kul'turah posle dvojnogo mechenija timidina tritiem i uglerodom-14 s pomoshh'ju metoda avtoradiografii s primeneniem dvojnoj jemul'sii. Pri takom issledovanii necelesoobrazno ispol'zovat' odin tolstyj jemul'sionnyj sloj, poskol'ku jeto ne pozvoljaet dobit'sja udovletvoritel'nogo okrashivanija kletok kostnogo mozga s pomosh'ju kraski Gimsa. Esli obrazec okrashivaetsja do avtoradiografii, ego nuzhno pokryt' zashhitnym sloem dlja sohranenija kraski, a jeto pogloshhaet bol'shoe kolichestvo jelektronov tritija.' Primenjaemyj metod predstavljaet soboj modifikaciju metoda, opisannogo Basergom i Nemerovym. Mazok kostnogo mozga pokryvajut ochen' tonkim sloem melkozernistoj jemul'sii Gevarta NUC 715. Posle obluchenija timidina tritiem v techenie neobhodimogo vremeni (1 — 5 dnej) jemul'siju obrabatyvajut, i kostnyj mozg mozhno dolzhnym obrazom okrasit' cherez tonkuju jemul'siju. Zatem obrazec pogruzhajut v 7%-nyj rastvor celloidina v amilacetate dlja sohranenija kraski vo vremja posledujushhih procedur (spirtovaja smes' udaljaet krasku). Zatem obrazec pogruzhajut v jemul'siju Kodak NTB-2, imejushhuju bolee krupnye zerna, chem pervaja jemul'sija, i podvergajut dejstviju jelektronov ugleroda-14 (2 — 6 nedel'). Vtoruju jemul'siju mozhno zatem obrabotat' bez vozdejstvija na krasku mazka kostnogo mozga. Blagodarja dovol'no tolstomu sloju celloidina, pogloshhajutsja vse jelektrony tritija, tak chto plotnost' zeren vo vtoroj jemul'sii uvelichivaetsja iskljuchitel'no za schet jelektronov ugleroda-14. Bolee togo, celloidinovyj sloj vse eshhe pozvoljaet poluchit' horoshuju avtoradiograficheskuju razreshajushhuju sposobnost' vo vtoroj jemul'sii. Avtoradiogrammy v pervoj i vtoroj jemul'sijah legko obnaruzhivajutsja blagodarja tomu, chto zerna imejut razlichnuju velichinu. Takim obrazom mozhno razlichat' kletki, soderzhashhie timidin, mechennyj tol'ko tritiem, ili timi- din, mechennyj tol'ko uglerodom-14, ili soderzhashhie timidin, mechennyj odnovremenno tritiem i uglerodom-14. Obsuzhdaetsja interpretacija rezul'tatov. (author)Additional details
Additional titles
- Original title (English)
- Autoradiographie de la Thymidine-
Publishing Information
- Publisher
- IAEA
- Imprint Place
- Vienna (International Atomic Energy Agency (IAEA))
- Imprint Title
- Radioisotope Sample Measurement Techniques in Medicine and Biology. Proceedings of the Symposium on Radioisotope Sample Measurement Techniques
- Imprint Pagination
- 741 p.
- Series
- Proceedings Series
- Journal Page Range
- p. 537-546
- ISSN
- 0074-1884
Conference
- Title
- Symposium on Radioisotope Sample Measurement Techniques in Medicine and Biology
- Dates
- 24-28 May 1965
- Place
- Vienna (Austria)
INIS
- Country of Publication
- International Atomic Energy Agency (IAEA)
- Country of Input or Organization
- International Atomic Energy Agency (IAEA)
- INIS RN
- 44086426
- Subject category
- S60: APPLIED LIFE SCIENCES;
- Resource subtype / Literary indicator
- Conference
- Descriptors DEI
- ACETIC ACID ESTERS; AUTORADIOGRAPHY; BONE MARROW; BONE MARROW CELLS; CARBON 14; DOUBLE LABELLING; EMULSIONS; GRAIN DENSITY; GRAIN SIZE; IMAGES; THYMIDINE; TRITIUM
- Descriptors DEC
- ANIMAL CELLS; ANIMAL TISSUES; AZINES; BETA DECAY RADIOISOTOPES; BETA-MINUS DECAY RADIOISOTOPES; BODY; CARBON ISOTOPES; CARBOXYLIC ACID ESTERS; COLLOIDS; CONNECTIVE TISSUE CELLS; DISPERSIONS; ESTERS; EVEN-EVEN NUCLEI; HEMATOPOIETIC SYSTEM; HETEROCYCLIC COMPOUNDS; HYDROGEN ISOTOPES; ISOTOPES; LABELLING; LIGHT NUCLEI; MICROSTRUCTURE; NUCLEI; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; ODD-EVEN NUCLEI; ORGANIC COMPOUNDS; ORGANIC NITROGEN COMPOUNDS; ORGANS; PYRIMIDINES; RADIOISOTOPES; RIBOSIDES; SIZE; SOMATIC CELLS; YEARS LIVING RADIOISOTOPES
Optional Information
- Notes
- 5 refs., 4 tabs., 3 figs.
- Secondary number(s)
- IAEA-SM--61/57