Comet-assay and Comet-fish for the detection of individual radiation and toxinesensitivities of genome regions
- 1. Institut fuer Molekulare Biotechnologie e.V. Jena (Germany). Abt. Einzelzell- und Einzelmolekueltechnik
- 2. Jena Friedrich Schiller Univ. (Germany). Inst. fuer Ernaehrungswissenschaften
Description
While in different areas of research, the COMET-Assay has become a standard technique, especially in basic research, the combination of COMET-Assay and fluorescence in situ hybridisation (FISH) is a novel technique used only in a few laboratories. This technique, called COMET-FISH, does not only allow to detect fragmented DNA and to measure the degree of DNA damage, but enables to allocate specific genomic loci in individual cells by specific fluorescence labelling. For the quantitative evaluation of the COMET-Assay commercially available systems with integrated image analysis exist. Such systems are completely missing for COMET-FISH up to now. The biochemical parameters of these technique have been optimised so far, that COMET-FISH has been successfully applied in different fields of research under different questions. Thus it has been achieved to use the COMET-FISH technique for the examination of different risk factors on effects of ionising and non-ionising radiation. In this context first studies are presented to access tumour risk factors of nutrition. Also some basic experiments are presented showing the correlation between sensitivity of selected genomic regions towards UV-A irradiation, repair activity and the density of active genes. The results applying the techniques presented here may be correlated for instance to measure nutrition induced changes on radiation sensitivity. The techniques will allow to use them in future also to examine other risk factors. Finally the COMET techniques could contribute to register risk factors on the individual level in order to obtain a better estimate for individual radiation sensitivity. (orig.)
Abstract (German)
Waehrend in verschiedenen Gebieten, insbesondere der Grundlagenforschung, der COMET-Assay zur Standardtechnik entwickelt wurde, ist die Kombination von COMET-Assay und Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) eine noch relativ junge und nur in wenigen Labors eingesetzte Technik. Diese COMET-FISH genannte Methode, erlaubt es, nicht nur das Vorhandensein fragmentierter DNA festzustellen, sondern die Zuordnung zu entsprechenden Genomloci aufgrund spezifischer Fluoreszenzsignale auf Einzellzellbasis durchzufuehren. Fuer die quantitative Auswertung des COMET-Assay gibt es mittlerweile schon kommerzielle Systeme mit entsprechender Datenverarbeitung, die auch fuer dosimetrische Untersuchungen eingesetzt werden. Solche Systeme fehlen fuer COMET-FISH noch vollstaendig. Dagegen wurden die biochemischen Parameter so weit optimiert, dass ein Einsatz in unterschiedlichen Forschungsgebieten mit unterschiedlichen Fragestellungen moeglich wurde. Damit ist ein wichtiger Schritt erreicht, die COMET-FISH Technik fuer Untersuchungen auf den Einfluss unterschiedlicher Risikofaktoren auf die Strahlenwirkung ionisierender oder nicht ionisierender Strahlen anzuwenden. In dieser Zusammenfassung werden hier erste Ansaetze gezeigt, Tumorrisikofaktoren der Ernaehrung zu untersuchen. Ebenso werden Basisexperimente vorgestellt, die z.B. den Zusammenhang von genetischer Aktivitaet, Reparaturaktivitaet und DNA-Bruchempfindlichkeit nach UV-A Bestrahlung erfassen. Die hier gezeigten Techniken liefern Ergebnisse, durch deren Kombination es moeglich werden sollte, z.B. durch Nahrungsbestandteile induzierte Veraenderungen auf die Strahlenempfindlichkeit zu messen. Die Flexibilitaet der Techniken sollte es in Zukunft erlauben, auch fuer Untersuchungen zu anderen Risikofaktoren eingesetzt zu werden. Letztendlich koennten COMET-Techniken dazu beitragen auch Risikofaktoren auf der individuellen Ebene zu erfassen und somit die individuelle Strahlenempfindlichkeit besser abschaetzen zu koennen. (orig.)Additional details
Additional titles
- Original title (German)
- Comet-Assay und Comet-Fish zur Detektion individueller Strahlen- und Toxinempfindlichkeit von Genom-Abschnitten
Publishing Information
- Publisher
- TUeV Verl. Rheinland
- Imprint Place
- Koeln (Germany)
- ISBN
- 3-8249-0618-X
- Imprint Title
- Radiobiology and radiation protection. Vol. 1. The significance of individual radiosensitivity with respect to radiation protection
- Imprint Pagination
- 387 p.
- Series
- Publikationsreihe Fortschritte im Strahlenschutz
- Journal Page Range
- p. 114-131
- ISSN
- 1013-4506
Conference
- Title
- Radiobiology and radiation protection. 32. annual meeting of 'Fachverband fuer Strahlenschutz' jointly with 'Arbeitskreisen zu Strahlenwirkung/Strahlenbiologie' and the combined unions in GAST
- Original Conference Title
- Strahlenbiologie und Strahlenschutz. 32. Jahrestagung des Fachverbandes fuer Strahlenschutz gemeinsam mit den Arbeitskreisen zu Strahlenwirkung/Strahlenbiologie der im GAST zusammengeschlossenen Verbaenden
- Dates
- 2-6 Oct 2000
- Place
- Bad Kissingen (Germany)
INIS
- Country of Publication
- Germany
- Country of Input or Organization
- Germany
- INIS RN
- 33003845
- Subject category
- S63: RADIATION, THERMAL, AND OTHER ENVIRONMENTAL POLLUTANT EFFECTS ON LIVING ORGANISMS AND BIOLOGICAL MATERIALS;
- Resource subtype / Literary indicator
- Conference
- Descriptors DEI
- BIOASSAY; CARCINOGENESIS; DNA; ELECTROPHORESIS; FLUORESCENCE; GENES; GENOME MUTATIONS; RADIOSENSITIVITY; RISK ASSESSMENT; SENSITIVITY; SOMATIC CELLS; TOXIC MATERIALS; ULTRAVIOLET RADIATION
- Descriptors DEC
- ANIMAL CELLS; ELECTROMAGNETIC RADIATION; EMISSION; HAZARDOUS MATERIALS; LUMINESCENCE; MATERIALS; MUTATIONS; NUCLEIC ACIDS; ORGANIC COMPOUNDS; PATHOGENESIS; PHOTON EMISSION; RADIATIONS; SEPARATION PROCESSES
Optional Information
- Notes
- Imprint:Strahlenbiologie und Strahlenschutz. Bd. 1. Individuelle Strahlenempfindlichkeit und ihre Bedeutung fuer den Strahlenschutz
- Secondary number(s)
- FS--00-113-T