Affinity chromatography of native and irradiated lactate dehydrogenase
Description
LDH V was irradiated in aqueous solution at a concentration of 1mg/ml in the presence of nitrogen or oxygen. The dose given was 1700 Gy. The irradiated enzyme was separated on 5'AMP Sepharose 4B. The NADH-gradient-eluted fraction was then further studied by determinations of activity, protein, and SH-groups. Gel electrophoresis was also performed on some of the samples. It could be shown that radiation-damaged protein was, overall, less firmly specificially bound. Completely inactivated protein was not bound at all and could be eluted with a buffer immediately after spreading. A wide flat peak was shown in activity determinations of NADH-gradient eluted samples. Radiosensitivity was increased by the presence of oxygen. With the aid of SH-group determination, three further peaks could be identified whereby peaks I and II were bound less strongly, and peak III more strongly than native enzyme. These three peaks are thought to represent different modifications of irradiated LDH. A detailed analysis could be the subject of further investigation. The presence of protein fragments was established by electrophoresis for samples irradiated under oxygen but were not found for samples irradiated under nitrogen. Affinity chromatography is an elegant and safe method for establishing the purity of substances from mixtures. It is, however, only of limited value for studying irradiated proteins. (orig.)
Availability note (English)
MF available from INIS under the Report Number.Abstract (German)
LDH V wurde in waessriger Loesung in der Konzentration von 1mg/ml sowohl unter Stickstoff wie unter Sauerstoff bestrahlt. Die Dosis betrug 1700 Gy. Das bestrahlte Enzym wurde ueber 5'AMP Sepharose 4B aufgetrennt. Die durch einen NADH-Gradienten eluierten Fraktionen wurden anschliessend mit Hilfe von Aktivitaetsbestimmung, Proteinbestimmung und SH-Gruppenbestimmung weiter untersucht. Von einigen Proben wurde auch eine Gelelektrophorese durchgefuehrt. Es konnte gezeigt werden, dass das strahlengeschaedigte Protein insgesamt weniger fest spezifisch gebunden wurde. Voellig inaktiviertes Enzym wurde ueberhaupt nicht gebunden, sondern konnte sofort nach dem Auftragen mit Puffer eluiert werden. Bei den mittels NADH-Gradient eluierten Proben zeigte die Aktivitaetsbestimmung einen breiten flachen Peak. Unter Sauerstoff war die Strahlensensibilitaet erhoeht. Mit Hilfe der SH-Bestimmung konnten drei verschiedene Pakete nachgewiesen werden, wobei Peak I und II weniger stark, Peak III staerker gebunden wurde als natives Enzym. Diese drei Peaks repraesentieren wohl verschiedene Modifikationen bestrahlter LDH. Eine genaue Analyse koennte Gegenstand weiterer Untersuchungen sein. Bei der Elektrophorese wurden bei den unter Sauerstoff bestrahlten Proben Proteinbruchstuecke nachgewiesen, die nach Bestrahlung unter Stickstoff nicht vorhanden waren. Die Affinitaetschromatographie ist eine elegante und sichere Methode zur Reindarstellung und Substanzen aus Stoffgemischen. Zur Untersuchung von bestrahlten Proteinen ist sie jedoch nur bedingt geeignet. (orig.)
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Additional details
Additional titles
- Original title (German)
- Affinitaetschromatographie nativer und bestrahlter Lactatdehydrogenase
Publishing Information
- Imprint Pagination
- 68 p.
- Report number
- INIS-mf--8825
INIS
- Country of Publication
- Germany
- Country of Input or Organization
- Germany
- INIS RN
- 15038590
- Subject category
- S63: RADIATION, THERMAL, AND OTHER ENVIRONMENTAL POLLUTANT EFFECTS ON LIVING ORGANISMS AND BIOLOGICAL MATERIALS; S38: RADIATION CHEMISTRY, RADIOCHEMISTRY AND NUCLEAR CHEMISTRY;
- Resource subtype / Literary indicator
- Thesis
- Descriptors DEI
- BIOCHEMISTRY; CHEMICAL RADIATION EFFECTS; IN VITRO; IRRADIATION; LACTATE DEHYDROGENASE; NITROGEN; OXYGEN; QUALITATIVE CHEMICAL ANALYSIS; QUANTITATIVE CHEMICAL ANALYSIS; RADIOLYSIS; RADIOSENSITIVITY; THIOLS; X RADIATION
- Descriptors DEC
- CHEMICAL ANALYSIS; CHEMICAL REACTIONS; CHEMISTRY; DECOMPOSITION; DEHYDROGENASES; ELECTROMAGNETIC RADIATION; ELEMENTS; ENZYMES; IONIZING RADIATIONS; NONMETALS; ORGANIC COMPOUNDS; ORGANIC SULFUR COMPOUNDS; OXIDOREDUCTASES; RADIATION EFFECTS; RADIATIONS