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AbstractAbstract
[en] The consequences of the decay of iodine-125 incorporated into DNA were studied on a molecular basis. Doubly (14C and 125I) labelled 5-iodo-2'-deoxycytidine 5'-triphosphate (IdCTP) was synthesized and incorporated enzymatically into the SalI-cutting site of the plasmid pBR 322. Part of the radioiodinated DNA was treated with T4-DNA ligase in order to restore the circular structure of the native plasmid molecule. After 4 months of storage under various conditions the stable end products were analyzed by radio GC, radio HPLC and electron microscopy. The experiments were not only carried out with doubly-labelled DNA but also with solutions of 14C-labelled DNA containing Na125I as internal radiation source. The results clearly indicate that radiolysis alone causes only minor damage. Transmutation of the covalently bound iodine, on the other hand, leads to complete destruction of the labelled nucleotide, giving rise to 14CO2 and 14CO as main products. The production of 14CO2 which originates from both the base as well as the sugar component shows a strong solvent effect. The electron microscopy analysis of the DNA reveals that the local effects are always connected with at least one double strand break directly at the site of decay. In addition, one finds DNA double strand breaks in areas which are hundreds of base pairs apart from that site. Under certain circumstances most of the DNA molecules exhibit up to 10 breaks. A comparison between ligase-treated and untreated DNA shows that the configuration of the DNA and the position of the labelled nucleotide play in important role in the extent of the overall damage. It could be demonstrated that there is a linear correlation between gaseous fragmentation products and the number of double strand breaks. (orig./MG)
[de]
Die Folgen des Zerfalls von Iod-125, das in DNA eingebaut ist, wurden auf molekularer Ebene untersucht. Ein iodiertes synthetisches Analogon wurde hergestellt, das sich in DNA einbauen laesst. Als solches diente doppeltmarkiertes [U-14C, 5-125I] (IdCTP). Es wurde in vitro mit Hilfe des Enzyms DNA-Polymerase an der Sal I-Schnittstelle des Plasmids pBR 322 eingebaut. Ein Teil der auf diese Weise iodierten DNA wurde durch Behandlung mit T4-Ligase wieder zum Ring geschlossen. Nach mehrmonatiger Lagerung erfolgte die Analyse der stabilen Endprodukte mit Hilfe der Radio-Gaschromatographie, Radiohochdruckfluessigkeitschromatographie und Elektronenmikroskopie. Zum Vergleich wurden die Effekte der internen Radiolyse durch die beim Zerfall von 125I emittierten Elektronen mit 14C-Ioddesoxycytidin-markierten DNA-Proben untersucht, die Na125I als interne Strahlenquelle in der Loesung enthielten. Es zeigte sich, dass die interne Radiolyse nur geringfuegige Strahlenschaeden hervorruft. Dagegen fuehrt die Transmutation von kovalent gebundenem Iod-125 zur vollstaendigen Zerstoerung des markierten Nukleotids, wobei 14CO2 und 14CO als Hauptprodukte auftreten. Die elektronenmikroskopische Analyse der DNA ergibt, dass die lokalen Schaeden stets mit einem Doppelstrangbruch verbunden sind. Darueberhinaus beobachtet man DNA-Doppelstrangbrueche auch noch in Bereichen, die viele hundert Basenpaare entfernt liegen. In Einzelfaellen ist der Hauptteil der DNA-Molekuele in bis zu 10 Fragmente zerlegt. Ein Vergleich zwischen Ligase-behandelter und unbehandelter DNA zeigt, dass die Konfiguration der DNA bzw. die Position des markierten Nukleotids innerhalb des DNA-Strangs fuer das Ausmass der Schaedigung eine wesentliche Rolle spielen. Auch die nicht-statistische Haeufigkeitsverteilung der Brueche innerhalb der DNA-Kette und die Tatsache, dass das Ausmass der DNA-Schaedigung stark vom Medium und von der Konfiguration des Makr-molekuels abhaengen, wurde hier erstmals nachgewiesen. (orig./MG)Original Title
Chemische und biologische Folgen des radioaktiven Zerfalls von Iod-125 in Plasmid-DNA
Primary Subject
Source
Sep 1983; 136 p; Diss.
Record Type
Report
Literature Type
Thesis/Dissertation
Report Number
Country of publication
BETA DECAY RADIOISOTOPES, BIOLOGICAL EFFECTS, CARBON COMPOUNDS, CARBON OXIDES, CHALCOGENIDES, DAYS LIVING RADIOISOTOPES, ELECTRON CAPTURE RADIOISOTOPES, INTERMEDIATE MASS NUCLEI, IODINE ISOTOPES, IRRADIATION, ISOTOPES, LABELLING, NUCLEI, NUCLEIC ACIDS, ODD-EVEN NUCLEI, ORGANIC COMPOUNDS, OXIDES, OXYGEN COMPOUNDS, RADIATION EFFECTS, RADIOISOTOPES
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