Se investigó la partición trifásica (TPP) para la extracción de aceite de semillas de Sesamum indicum L. Los parámetros del proceso, como la concentración de sal, la proporción de suspensión/t-butanol y el pH del sistema, fueron estandarizados. Las condiciones óptimas para la recuperación máxima de aceite utilizando TPP fueron una concentración de sulfato de amonio del 40% (p/v), una relación de suspensión/t-butanol de 1: 1 (v/v) y un pH del sistema de 5.0. Las semillas en polvo se sometieron a una partición trifásica asistida por enzimas (EATPP) que se trata previamente con pectinasa, proteasa y mezcla de α-amilasa y amilo-glucosidasa (relación 1:1) seguida de TPP (como condiciones estandarizadas) y su eficacia como recuperación de aceite se compara con TPP y extracción con solventes (SE). De todas las enzimas estudiadas, la EATPP con pectinasa produjo la mayor recuperación de aceite (86.12%), que es mayor que la de TPP (78.24%). Los ácidos grasos libres, el índice de saponificación y de peróxidos fueron más bajos en el caso de TPP y EATPP en comparación con SE lo que indica mejor calidad del aceite.