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AbstractAbstract
[en] For the photoaffinity labelling of E.coli ribosomes in the region of peptidyl transferase, an analogue to the substrate peptidyl-tRNA-ethyl-2-diazomalalonyl-Phe-tRNAsup(Phe) was synthesized. UV irradiation of the reversible complex with 70S ribosomes and poly(U) led to the formation of a covalent bond between N-acyl-Phe-tRNA and 23S-rRNA. The irreversibly bound N-acyl-phenylalanyl group may be transferred to puromycin in a reaction catalyzed by peptidyl transferase, in the presence of the Phe-tRNA, it forms products of a peptide synthesis covalently bound to 23S-RNA. The 23S-rRNA sequence thus labelled, which has not yet been identified, should therefore be in the active centre of the peptidyl transferase or in its near neighbourhood. An analysis of the reaction product showed that the N-acyl-Phe-tRNA is bound specifically to one or more sites of a 3'-terminal 18S fragment of the 23S-RNA. An attempt to prove the existence of further tRNA interaction with ribosonal substrate binding sites led to the discovery of a poly(U2,G)-stimulated, UV-inducible irreversible binding of valin-specific tRNA (E.coli) to 16S-rRNA in one or several tRNA decoding sites. A preliminary analysis of the T1 fragments of tRNAsup(Val) after binding to 16S-rRNA indicates that the DHU loop of tRNA takes part in this photoreaction. (orig.)
[de]
Zum Zwecke einer Photoaffinitaetsmarkierung von E.coli-Ribosomen im Bereich der Peptidyltransferase wurde ein Analogon des Substrates Peptidyl-tRNA - Aethyl-2-diazomalonyl-Phe-tRNAsup(Phe) - synthetisiert. UV-Bestrahlung des reversiblen Komplexes mit 70S-Ribosomen und Poly(U) fuehrt zu einer kovalenten Verknuepfung der N-Acyl-Phe-tRNA mit 23S-rRNA. Die irreversibel gebundene N-Acyl-Phenylalanyl-Gruppe kann in einer Peptidyl-transferase-katalysierten Reaktion auf Puromycin uebertragen werden und bildet in Gegenwart von Phe-tRNA kovalent mit der 23S-RNA verbrueckte Produkte einer Peptidsynthese. Die so markierte, noch nicht identifizierte 23S-rRNA-Sequenz duerfte sich demnach im aktiven Zentrum der Peptidyltransferase oder in dessen naechster Umgebung befinden. Eine Analyse des Reaktionsproduktes ergab, dass die N-Acyl-Phe-tRNA spezifisch an eine oder mehrere Stellen eines 3'-terminalen 18S-Fragmentes der 23S-RNA gebunden wird. Der Versuch, andere Wechselwirkungen von tRNA mit ribosomalen Substratbindestellen nachzuweisen, fuehrte zur Entdeckung einer Poly(U2,G)-stimulierten, UV-induzierbaren irreversiblen Bindung von Valin-spezifischer tRNA (E.coli) an 16S-rRNA in einer oder mehreren tRNA-Decodierstellen. Eine vorlaeufige Analyse der T1-Fragmente von tRNAsup(Val) nach der Verknuepfung mit 16S-rRNA weist auf eine Beteiligung der DHU-Schleife der tRNA bei dieser Photoreaktion hin. (orig.)Original Title
Photoaffinitaetsmarkierungen ribosomaler t-RNA-Bindestellen
Primary Subject
Source
30 Apr 1976; 72 p; With figs., tabs. and refs.; Diss. (D.Sc.).
Record Type
Miscellaneous
Literature Type
Thesis/Dissertation
Report Number
Country of publication
AMINO ACIDS, ANTIBIOTICS, AROMATICS, CARBON COMPOUNDS, CARBOXYLIC ACIDS, CELL CONSTITUENTS, CHEMISTRY, DRUGS, ELECTROMAGNETIC RADIATION, ENZYMES, HYDROGEN COMPOUNDS, ISOTOPE APPLICATIONS, NUCLEIC ACIDS, NUCLEOTIDES, ORGANIC ACIDS, ORGANIC COMPOUNDS, ORGANIC NITROGEN COMPOUNDS, ORGANOIDS, PROTEINS, RADIATIONS, RNA
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